elisa試劑盒是用來干什么的？一文了解ELISA試劑盒的作用及原理

  elisa試劑盒是用來干什么的?ELISA試劑盒，又稱酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）。ELISA是一種比較常用的實驗室技術，用于檢測和定量分析生物樣本中的蛋白質(zhì)和其他分子。它在科研、醫(yī)療、生物學和食品安全領域使用比較廣泛，你知道它們的原理和實驗步驟嗎？上海通蔚帶您詳細了解一下。
  

    ELISA實驗原理

  
    ELISA測定法通常在96或384微孔板中進行。這些板被設計成通常通過直接吸附到微量滴定板的表面上或間接地通過預先包被的抗體間接地結(jié)合和固定抗原。固定后，將一抗引入樣品中，與抗原形成免疫復合物。一抗可以共價標記到酶（例如HRP）上，或者如果一抗被生物素標記，則一抗本身可以使用酶標記的二級抗體或鏈霉親和素偶聯(lián)物間接檢測。通過與合適的底物孵育來評估共軛酶的活性，從而實現(xiàn)檢測，該底物會產(chǎn)生可測量的副產(chǎn)物。
  
    Elisa檢測類分為4種類型，有直接elisa法、間接elisa法、夾心elisa法和競爭elisa法。具體使用哪種方法可以結(jié)合自己可用的抗體、所需的結(jié)果或樣品的復雜性進行調(diào)整。上述四種類型大家可以參考此篇文章《elisa試劑盒有哪幾種類型？elisa四類型圖解》。

圖1 elisa實驗

  

    ELISA實驗步驟

  
    在進行elisa實驗之前，要進行充分的實驗準備，在實驗前咨詢閱讀說明書，了解實驗注意事項。其次，需要準備實驗所需的試劑和設備，如酶標板、抗體溶液、抗原溶液、洗滌液、酶標底物等。
  
    第一步、抗原包被
  
    將抗原溶液加入酶標板中，使其在酶標板上形成一層薄薄的膜層。抗原包被的濃度和時間對實驗結(jié)果有很大影響，需要仔細控制。
  
    第二步、洗滌
  
    洗滌是ELISA實驗中非常重要的一步，它可以去除未結(jié)合的抗原和抗體，減少背景噪音。洗滌時要保證酶標板充分搖動，確保每個孔都能清洗干凈。
  
    第三步、加樣
  
    將樣本和抗體溶液加入酶標板中，讓它們與抗原結(jié)合。加樣時要保證每個孔的體積相同，避免出現(xiàn)誤差。
  
    第四步、孵育
  
    讓抗原和抗體在一定溫度下孵育一定時間，以便它們充分結(jié)合。孵育時間需要根據(jù)實驗的具體情況而定，一般需要在37℃下進行1-2小時。
  
    第五步、洗滌
  
    孵育結(jié)束后，再次進行洗滌，去除未結(jié)合的抗體和抗原。洗滌時要保證每個孔都能清洗干凈，避免交叉污染。
  
    第六步、加酶標物
  
    將酶標物加入酶標板中，讓它與抗體結(jié)合。加酶標物時要保證每個孔的體積相同，避免出現(xiàn)誤差。
  
    第七步、顯色
  
    在酶的作用下，底物被氧化并釋放出色素，形成明顯的顏色變化。顯色時間需要根據(jù)實驗的具體情況而定，一般需要在室溫下進行30分鐘以上。
  
    第八步、終止反應
  
    當顏色變化達到最大程度時，需要加入終止液，停止酶的活性，防止底物過度反應。
  
    第九步、檢測結(jié)果
  
    通過酶標儀檢測各孔的光密度值，計算出抗原或抗體的濃度。在檢測結(jié)果分析時，需要考慮到實驗的特異性、靈敏度、重復性和準確性等方面。

  

圖2.ELISA實驗步驟圖

    ELISA應用領域

  
    ELISA 測試有多種應用，例如食品工業(yè)、疫苗開發(fā)、免疫學、診斷、毒理學、藥物監(jiān)測、制藥工業(yè)和移植。
  
    食品工業(yè)
  
    ELISA 在食品工業(yè)中發(fā)揮著重要作用。它是識別食物過敏原（例如牛奶、花生、核桃、杏仁和雞蛋中的過敏原）的主要平臺。 ELISA 還可用于證實食品的真實性。該技術對于避免冒充替代可能造成的經(jīng)濟損失有很大幫助。
  
    疫苗開發(fā)
  
    疫苗開發(fā)是 ELISA 的一個非常重要的應用，它是 ELISA 過程的一個很好的候選者?？梢詼y試來自免疫動物或人類模型的血清樣本，以檢測是否存在針對故意注射到宿主體內(nèi)的某些類型抗原的抗體。
  
    免疫學
  
    身體的防御者，免疫系統(tǒng)，可以以細胞或體液（先天或適應性）模式運作。測量和監(jiān)測免疫反應的變化是了解免疫疾病的基礎。各種研究已證明 ELISA 是此類測量和監(jiān)測的金標準方法，該方法快速且經(jīng)濟高效。
  
    體液免疫
  
    ELISA 在研究免疫系統(tǒng)對不同類別感染的體液反應方面也顯示出巨大的潛力。體液免疫反應涉及體液中存在的物質(zhì)（抗體和其他成分）。對這些組件的監(jiān)控和測量非常重要。
  
    診斷
  
    在診斷領域，ELISA 已被證明是一個在全球范圍內(nèi)應用的強大平臺，可用于檢測人類和動物的多種疾病類型。市場上有許多不同的商業(yè) ELISA 試劑盒可用于檢測 HIV、流感、登革熱、埃博拉、恰加斯病、利什曼病、萊姆病、西尼羅河病毒等。即使在植物病理學中，ELISA 技術也越來越受到關注。 ELISA 成功克服了以前在植物診斷中進行的血清學分析的缺點
  
    懷孕測試
  
    許多不同的生物分子實體，包括人絨毛膜促性腺激素（hCG）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌三醇（E3）和促甲狀腺激素（TSH）可以因懷孕而表達。 ELISA 可以在妊娠早期從母體血液、唾液或尿液中檢測到其中一些蛋白質(zhì)。 HCG 是常見的激素之一，可在受精后第一個月通過 ELISA 檢測到。另一種與妊娠相關的生物分子是雌三醇 (E3)，可在妊娠第 6 周時通過唾液中的 ELISA 檢測到。
  
    癌癥檢測
  
    高度靈敏的癌癥檢測提供了早期診斷，這對于患者的生存至關重要。然而，癌癥生物標志物是作為目標分析物最具挑戰(zhàn)性的生物分子實體之一。 ELISA 技術的進步有望應用于癌癥生物標志物的檢測。

  

    ELISA優(yōu)勢和局限性

  
    1.優(yōu)勢：
  
    （1）靈敏度高：ELISA試劑盒的檢測靈敏度較高，能夠檢測出低濃度的抗原或抗體。
  
    （2）特異性好：由于采用了抗原-抗體反應的原理，ELISA試劑盒具有很好的特異性，能夠區(qū)分不同抗原或抗體的差異。
  
    （3）操作簡便：ELISA試劑盒的操作相對簡單，易于標準化和自動化。
  
    （4）適用范圍廣：ELISA試劑盒可以用于各種不同樣品類型的檢測，如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清液等。
  
    2.局限性：
  
    （1）假陽性問題：由于抗原-抗體反應的交叉反應性，ELISA試劑盒有時會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
  
    （2）非特異性結(jié)合：樣品中的非特異性物質(zhì)可能與抗體或抗原發(fā)生結(jié)合，導致檢測結(jié)果的不準確。
  
    （3）不同樣品間的差異：不同樣品來源的抗原或抗體可能存在差異，影響ELISA試劑盒的檢測結(jié)果。
  
    上述是通蔚為大家介紹了elisa試劑盒是用來干什么的，了解elisa原理、步驟及應用。相信你對ELISA試劑盒有所了解，ELISA試劑盒應用比較廣泛及自身優(yōu)勢成為實驗室主流檢測技術。上海通蔚生物是一家科研和銷售科學試劑產(chǎn)品，有人elisa試劑盒、動植物elisa試劑盒，如果想進一步了解elisa試劑盒，歡迎前來咨詢我們在線顧問。