ELISA 與蛋白質(zhì)印跡：兩種常見免疫測定法的比較

  在生物醫(yī)學研究中，"免疫測定"一詞是常用術(shù)語。對于實驗室工作人員來說，免疫測定有不同類型是常識。

  什么是免疫測定？

  免疫測定是一種借助抗體-抗原相互作用或反應來評估給定溶液中大分子的存在和濃度的技術(shù)。

  在我們之前的一些文章中，我們重點介紹了兩種免疫測定法——ELISA 和蛋白質(zhì)印跡——廣泛用作蛋白質(zhì)濃度分析的生物分析方法。鑒于兩者具有相似的目的，即使對于最熟練的實驗室專家來說，兩者之間的選擇也是一個挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)印跡法和 Elisa 法哪個更好？– 迄今為止，對于大多數(shù)科研人員來說，這是一個重要的困境。

  在本文中，上海通蔚通過強調(diào)這兩種生化技術(shù)的差異并比較它們在實驗室應用中的可用性和適用性，讓您深入了解這兩種生化技術(shù)。我們希望這些信息能夠消除您的疑慮并回答您有關(guān)該主題的所有問題。

  什么是酶聯(lián)免疫吸附測定？

  酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA) 是一種經(jīng)濟有效的分析工具，通常用于分析抗體、抗原、蛋白質(zhì)和糖蛋白。ELISA 是免疫測定的黃金標準，靈敏度高，是一種測量尿液、血清或細胞培養(yǎng)物等各種樣品中蛋白質(zhì)存在情況的簡單方法。Elisas 還有助于廣泛應用的細胞因子分析，包括神經(jīng)系統(tǒng)疾病的分析。

圖1 elisa

  目前，elisa方法分為4種類型，分別包括：

  1、直接elisa

  2、間接elisa

  3、夾心elisa

  4、競爭elisa

  在 ELISA 方法中，樣品中的抗原附著在聚苯乙烯板上。使用與酶結(jié)合的相同抗體來使抗原與其結(jié)合。洗滌后，從板上除去所有未結(jié)合的抗體，并在洗滌后應用酶底物。當發(fā)生結(jié)合時，這種酶底物會產(chǎn)生可見信號，例如顏色變化。

  Elisa優(yōu)缺點

  一、Elisa優(yōu)點：

  1、Elisa 方法最適合檢測極少量、稀有或低豐度的目標蛋白。

  2、Elisa 免疫分析高度靈敏，可以測量樣品中目標蛋白的精確含量。

  3、該技術(shù)對于測定蛋白質(zhì)濃度或監(jiān)測一段時間內(nèi)蛋白質(zhì)水平的變化非常有用。

  4、ELISA 可以非?？焖俚靥峁└咄?，易于執(zhí)行，并且?guī)缀醪恍枰獮楦鞣N應用準備樣品。因此，對于時間緊迫的實驗室專家來說，這種方法是日常或定期進行檢測的便捷選擇。

  5、Elisa 檢測具有成本效益。

  二、Elisa缺點：

  1、傳統(tǒng)上，一種 Elisa 檢測只能靶向一種蛋白質(zhì)，因此不可能進行多重檢測。因此，同時分析單個樣品中的多種蛋白質(zhì)變得很困難。

  2、ELISA 檢測的靈敏度范圍有限。

  3、除了目標分子之外，Elisa 測定中使用的抗體還可以結(jié)合相似或結(jié)構(gòu)相關(guān)的分子。這可能導致假陽性或假陰性結(jié)果，并影響測定的準確性、可靠性和特異性。

  4、Elisa 檢測有時會干擾樣品基質(zhì)，從而導致靈敏度或特異性降低。

  5、ELISA 檢測缺乏標準化可能是一個限制。

  什么是蛋白質(zhì)印跡技術(shù)？

  蛋白質(zhì)印跡程序是廣泛用于蛋白質(zhì)分析的最典型的細胞和分子生物學程序之一。蛋白質(zhì)印跡法也稱為蛋白質(zhì)免疫印跡法，有助于確定給定樣品中特定蛋白質(zhì)的存在、大小和數(shù)量。蛋白質(zhì)印跡步驟包括：

圖2 蛋白質(zhì)印跡

  1）按尺寸分離，

  2) 轉(zhuǎn)移到固體支持物或膜上，并且

  3) 使用適當?shù)囊豢购投箻擞浤繕说鞍滓赃M行可視化。

  蛋白質(zhì)印跡原理

  蛋白質(zhì)印跡分析依賴于聚丙烯凝膠電泳和抗體的使用。該技術(shù)允許研究人員使用電泳（充當分子篩）根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量和類型從凝膠狀樣品中分離和識別蛋白質(zhì)。

   然后分離的蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)運到膜上，其中每個蛋白質(zhì)形成一條帶。然后用標記的抗體處理膜，這些抗體針對所需的蛋白質(zhì)以產(chǎn)生彩色條帶。可以鑒定這些抗體，并且可以根據(jù)已建立的標準或?qū)φ諄矸治鼋Y(jié)合蛋白的大小和豐度。

  蛋白質(zhì)印跡優(yōu)缺點

  一、蛋白質(zhì)印跡優(yōu)點：

  1、使用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)，可以從具有相似特性或尺寸的細胞中提取的復雜蛋白質(zhì)混合物中分離出單個蛋白質(zhì)。

  2、蛋白質(zhì)印跡非常適合分析復雜的混合物，例如細胞裂解物，并且可以檢測目標蛋白水平較低的樣品中的特定目標蛋白。

  3、該技術(shù)可以利用蛋白質(zhì)大小、豐度、分子量等因素以及了解蛋白質(zhì)表達模式、研究蛋白質(zhì)修飾以及研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用和雜質(zhì)所必需的信息來確認蛋白質(zhì)。

  4、蛋白質(zhì)印跡可用于蛋白質(zhì)表達水平的定量分析。

  5、蛋白質(zhì)印跡具有多種用途，因為它可以使用多種樣品類型，包括細胞裂解物、組織、血液和其他生物液體。

  6、蛋白質(zhì)印跡法通常用作驗證技術(shù)來驗證從其他測定（例如 ELISA 或質(zhì)譜法）獲得的結(jié)果。

  二、蛋白質(zhì)印跡缺點：

  1、蛋白質(zhì)印跡可以提供相對蛋白質(zhì)豐度的估計，這使其成為一種半定量技術(shù)而不是絕對定量方法。

  2、蛋白質(zhì)大小的分辨率可能受到限制，特別是對于具有相似分子量的蛋白質(zhì)。

  3、蛋白質(zhì)印跡對樣品的變異性和復雜性很敏感。

  4、與 Elisa 檢測一樣，蛋白質(zhì)印跡中使用的抗體可能會表現(xiàn)出交叉反應性，與非預期的蛋白質(zhì)結(jié)合或產(chǎn)生非特異性信號，導致假陽性或假陰性結(jié)果并影響數(shù)據(jù)解釋。

  5、蛋白質(zhì)印跡可能并不總能提供蛋白質(zhì)修飾的全面分析。

  6、蛋白質(zhì)印跡涉及凝膠電泳、蛋白轉(zhuǎn)移、封閉、抗體孵育和信號檢測等多個步驟，耗時、費力且成本高昂。

  7、蛋白質(zhì)印跡結(jié)果的解釋可能是主觀的，特別是在比較相對線強度時，并且需要經(jīng)過訓練的眼睛。

  ELISA 與蛋白質(zhì)印跡對比

  現(xiàn)在我們知道了這兩種技術(shù)的優(yōu)點和局限性，我們比較下表中的主要差異。

特征	elisa	蛋白質(zhì)印跡
原理	酶標記免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）	蛋白質(zhì)分離和免疫檢測
檢測對象	液態(tài)樣品（例如血清、細胞培養(yǎng)上清）	細胞提取物、組織提取物
靈敏度	通常具有較高的靈敏度，可檢測低至pg/mL水平的蛋白質(zhì)	可以非常靈敏地檢測特定蛋白質(zhì)
多樣性	可以用于檢測多種蛋白質(zhì)，需要有對應的抗體	可以檢測多個蛋白質(zhì)，但需要進行多輪實驗
自動化程度	可以進行高通量分析，并且有許多商業(yè)化的自動化系統(tǒng)可供選擇	較難進行高通量分析，通常需要手工操作
耗時	可以在幾小時內(nèi)完成整個實驗	實驗時間較長，通常需要一天或更長時間
成本	相對較低，ELISA試劑盒的成本較低	儀器和試劑成本較高

  據(jù)觀察，這兩種技術(shù)都可以檢測和定量蛋白質(zhì)，各有優(yōu)缺點。我們希望這些信息可以幫助您就最適合您的實驗室實驗或應用的方法做出更明智的決定。