【通蔚生物】：分享怎么用流式解決細(xì)胞周期檢測(cè)

細(xì)胞周期是指從一次細(xì)胞分裂形成子細(xì)胞開始到下一次細(xì)胞分裂形成子細(xì)胞為止所經(jīng)歷的過程，可反映細(xì)胞增殖的速度。
細(xì)胞周期由多個(gè)階段組成，通常包括G1期(細(xì)胞大小增加)、S期(DNA合成和復(fù)制)、G2期(細(xì)胞進(jìn)一步生長(zhǎng))，以及M期(有絲分裂和細(xì)胞分裂)、GO期(細(xì)胞靜息休眠)。在細(xì)胞周期的不同時(shí)期，細(xì)胞核內(nèi)的DNA含量存在差異。使用染料對(duì)DNA進(jìn)行染色(如PI染料)，可根據(jù)其熒光強(qiáng)度判斷細(xì)胞所處時(shí)期——DNA含量多，熒光強(qiáng)度高，DNA含量少，熒光強(qiáng)度低。檢測(cè)過程中，常遇見可以當(dāng)天檢測(cè)的活細(xì)胞樣本，以及當(dāng)天無法檢測(cè)的活細(xì)胞樣本，通蔚自主研發(fā)的細(xì)胞周期檢測(cè)產(chǎn)品就派上大用處了，既能檢測(cè)活細(xì)胞又能檢測(cè)固定細(xì)胞。

活細(xì)胞/固定細(xì)胞周期檢測(cè)檢測(cè)步驟已為大家整理好，如下：
流式細(xì)胞周期檢測(cè)中有許多需要注意的事項(xiàng)，來看制備單細(xì)胞懸液，操作應(yīng)輕柔，減少碎片，但消化要充分而不過度，保證細(xì)胞不粘連、不破裂，染色要充分；最低速度上機(jī)檢測(cè)，降低CV，避免儀器把相鄰細(xì)胞當(dāng)做一個(gè)細(xì)胞；排除粘連體，避免細(xì)胞粘黏檢測(cè)的DNA含量為非2倍體，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確PI的坐標(biāo)選線性，線性更能體現(xiàn)DNA含量的倍數(shù)關(guān)系；利用RNase消除細(xì)胞周期檢測(cè)中RNA的影響，PI是一種插入性核酸熒光染料，能選擇性地嵌入核酸DNA雙鏈螺旋的堿基之間并發(fā)出熒光，但也可以插RNA的雙鏈區(qū)，非 DNA特異性，需加入RNase消除RNA的影響；進(jìn)行DNA染色時(shí)不要洗滌，不同于蛋白質(zhì)染料和細(xì)胞之間的牢固結(jié)合，DNA與染料的結(jié)合，是一種結(jié)合態(tài)與游離態(tài)之間松散的平衡，洗滌步驟會(huì)造成染料丟失，降低核酸的特異性熒光，造成測(cè)量值降低；實(shí)驗(yàn)放最后做，由于PI具有黏性，通常周期實(shí)驗(yàn)放在最后做，否則需要深度清洗后，再進(jìn)行其它實(shí)驗(yàn)。