發(fā)布時間:2024-02-23 發(fā)布作者:通蔚生物
什么是elisa試劑盒?elisa是最經(jīng)典的一種免疫學實驗操作實驗,中文名字叫酶聯(lián)免疫吸附測定實驗。酶聯(lián)免疫吸附實驗(elisa)是一種用來定量檢測樣本中的某種抗原方法。因此,因此在許多研究和檢測領域中使用 ELISA 來檢測和定量各種樣本類型中的抗原,如使用 ELISA 分析細胞裂解物、血樣、食品等特定物質(zhì)。常見檢測領域包括如生物學、醫(yī)學、農(nóng)學等。
酶聯(lián)免疫吸附實驗(elisa)是一種高敏度的定量實驗,通常用于測量生物樣品中分析物的濃度,如細胞因子和抗體。這種方法的一般原理包括三個步驟:
首先是將目標分析物捕獲或固定在微孔板上,然后用目標特異性檢測蛋白檢測分析物,最后就是酶反應,既共軛酶將底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物。根據(jù)不同的捕獲方法和檢測方法,elisa可以分為四種方法。
ELISA有四種主要的方法:直接法、間接法、夾心法和競爭法。每種類型的描述如下,并用圖說明了分析物和抗體是如何結(jié)合和使用的。
1.直接法(酶標抗體結(jié)合抗原)
待測抗原粘附在微孔板的孔內(nèi),然后使用帶酶標的一抗與抗原結(jié)合,最后加入底物進行顯色,并檢測吸光度。由于吸光度的大小與抗原體復合物的數(shù)量成一定的線性關系。因此,也就間接的實現(xiàn)了測定抗原數(shù)量的目標。
2.間接法(一抗結(jié)合抗原,酶標二抗結(jié)合一抗)
和直接法的區(qū)別在于兩種抗體代替一種抗體,結(jié)合抗原的抗體(一抗)不帶酶標記物,當抗原和抗體結(jié)合后,再使用帶酶標的二抗結(jié)合一抗,加入底物顯色并檢測。
3.夾心法(捕獲抗體和一抗結(jié)合抗原,酶標二抗結(jié)合一抗)
在間接法基礎上又再發(fā)展出更為復雜的夾心法,它在微孔底部預先包被一種捕獲抗體,用于結(jié)合抗原,在這個復合物的基礎上再結(jié)合一抗、二抗并檢測。
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直接法 |
間接法、夾心法 |
優(yōu)點 |
操作簡單 不存在抗原和二抗發(fā)生交叉反應導致的結(jié)構(gòu)錯誤 |
二抗選擇面廣泛,制備也比較簡單,大大降低成本;酶標種類也有更多選擇 一抗無需考慮標記酶標信息,所以它在制備過程可以盡可能的保證免疫結(jié)合活性,檢測靈敏度大大提高,因為信號得到放大。 |
缺點 |
檢測抗體制備比較困難且成本比較高,因為既要保證免疫活性還要標記酶信息,檢測信號無法放大,信號越弱 |
潛在的二抗與目標抗原發(fā)生反應,造成信號錯亂風險,更多操作步驟,反應時間更長。 |
4.競爭法(酶標抗原和抗原競爭結(jié)合抗體)
無法同時結(jié)合捕獲抗體和一抗的話,就不適合用夾心檢測。此時可以在微孔板孔內(nèi)包被抗體,同時提供帶標記的同種抗原,把待檢測抗原和標記抗原一起加入和抗體結(jié)合,由于兩者會競爭結(jié)合抗體,所以最終檢測的信號越高,證明代測抗原越少,反之則越多。
感興趣的物質(zhì)越多,發(fā)生的反應就越多,與固體表面結(jié)合的連接酶就越少。這些反應通常通過溶液顏色的變化來指示。