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什么是elisa試劑盒?elisa試劑盒是用來檢測什么的?

發(fā)布時間:2024-02-23     發(fā)布作者:通蔚生物

什么是elisa試劑盒?elisa是最經(jīng)典的一種免疫學實驗操作實驗,中文名字叫酶聯(lián)免疫吸附測定實驗。酶聯(lián)免疫吸附實驗(elisa)是一種用來定量檢測樣本中的某種抗原方法。因此,因此在許多研究和檢測領域中使用 ELISA 來檢測和定量各種樣本類型中的抗原,如使用 ELISA 分析細胞裂解物、血樣、食品等特定物質(zhì)。常見檢測領域包括生物學、醫(yī)學、農(nóng)學等。


elisa試劑盒


Elisa試劑盒原理


酶聯(lián)免疫吸附實驗(elisa)是一種高敏度的定量實驗,通常用于測量生物樣品中分析物的濃度,如細胞因子和抗體。這種方法的一般原理包括三個步驟:


首先是將目標分析物捕獲或固定在微孔板上,然后用目標特異性檢測蛋白檢測分析物,最后就是酶反應,既共軛酶將底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物。根據(jù)不同的捕獲方法和檢測方法,elisa可以分為四種方法。



elisa方法


ELISA有四種主要的方法:直接法、間接法、夾心法和競爭法。每種類型的描述如下,并用圖說明了分析物和抗體是如何結(jié)合和使用的。


1.直接法(酶標抗體結(jié)合抗原)


待測抗原粘附在微孔板的孔內(nèi),然后使用帶酶標的一抗與抗原結(jié)合,最后加入底物進行顯色,并檢測吸光度。由于吸光度的大小與抗原體復合物的數(shù)量成一定的線性關系。因此,也就間接的實現(xiàn)了測定抗原數(shù)量的目標。

直接法


2.間接法(一抗結(jié)合抗原,酶標二抗結(jié)合一抗)


和直接法的區(qū)別在于兩種抗體代替一種抗體,結(jié)合抗原的抗體(一抗)不帶酶標記物,當抗原和抗體結(jié)合后,再使用帶酶標的二抗結(jié)合一抗,加入底物顯色并檢測。

間接法


3.夾心法(捕獲抗體和一抗結(jié)合抗原,酶標二抗結(jié)合一抗)


在間接法基礎上又再發(fā)展出更為復雜的夾心法,它在微孔底部預先包被一種捕獲抗體,用于結(jié)合抗原,在這個復合物的基礎上再結(jié)合一抗、二抗并檢測。


直接法

間接法、夾心法

優(yōu)點

操作簡單

不存在抗原和二抗發(fā)生交叉反應導致的結(jié)構(gòu)錯誤

二抗選擇面廣泛,制備也比較簡單,大大降低成本;酶標種類也有更多選擇

一抗無需考慮標記酶標信息,所以它在制備過程可以盡可能的保證免疫結(jié)合活性,檢測靈敏度大大提高,因為信號得到放大。

缺點

檢測抗體制備比較困難且成本比較高,因為既要保證免疫活性還要標記酶信息,檢測信號無法放大,信號越弱

潛在的二抗與目標抗原發(fā)生反應,造成信號錯亂風險,更多操作步驟,反應時間更長。


  4.競爭法(酶標抗原和抗原競爭結(jié)合抗體)
  
  無法同時結(jié)合捕獲抗體和一抗的話,就不適合用夾心檢測。此時可以在微孔板孔內(nèi)包被抗體,同時提供帶標記的同種抗原,把待檢測抗原和標記抗原一起加入和抗體結(jié)合,由于兩者會競爭結(jié)合抗體,所以最終檢測的信號越高,證明代測抗原越少,反之則越多。


競爭法
  


  Elisa試劑盒檢測步驟

  
  ELISA 是最簡單的血液檢測之一。它快速、快捷,并且需要患者的血液樣本。ELISA的整個過程如下所述。
  
  抗體附著在作為固體表面的聚苯乙烯板上,并被細菌、其他抗體和激素吸引或具有親和力。
  
  將抗原-抗體混合物填充到包被有抗原的微量滴定板上,然后通過洗滌除去游離抗體。
  
  添加對一抗具有特異性的二抗,該二抗通常與酶結(jié)合。
  
  通過清洗板去除游離的酶聯(lián)二抗。
  
  最后,添加底物。底物被酶轉(zhuǎn)化形成有色產(chǎn)物,可以通過分光光度法進行測量。
  
  通過ELISA檢測表明懷孕的HCG蛋白。將血液或尿液樣本和與酶連接的純化 HCG 組合添加到系統(tǒng)中。如果測試樣品中不存在 HCG,則只有連接的酶與固體表面結(jié)合。
  

  感興趣的物質(zhì)越多,發(fā)生的反應就越多,與固體表面結(jié)合的連接酶就越少。這些反應通常通過溶液顏色的變化來指示。


  elisa試劑盒流程


  Elisa試劑盒的優(yōu)點

  
  以下是 ELISA 技術的一些優(yōu)點:
  
  由于使用了兩種抗體,從 ELISA 獲取的結(jié)果可以準確診斷特定疾病。
  
  可以對復雜的樣品進行檢測,因為不需要純化抗原即可檢測。
  
  由于可以進行直接和間接分析方法,因此反應靈敏。
  
  這是一個快速測試,很快就能得出結(jié)果。
  
  ELISA 的可能檢測范圍包括定量、半定量、標準曲線、定性、校準曲線模型等。
  
  與需要放射性物質(zhì)存在的其他測定相比,更容易執(zhí)行且過程簡單。
  

  elisa試劑盒是用來檢測什么的

  
  Elisa檢測如下:
  
  可以確定樣品中抗體和抗原的存在。
  
  它在食品工業(yè)中用于檢測存在的任何食品過敏原。
  
  測定病毒測試中血清抗體的濃度。
  
  在 疾病爆發(fā)期間,為了評估疾病的傳播,例如在最近的 COVID-19 爆發(fā)期間,正在使用快速檢測試劑盒來確定血液樣本中是否存在抗體。
  

  ELISA常見問題解答

  
  1. 試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫,會有什么影響?
  
  如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫(20~25℃),可能會導致溫育時間不夠,從而使OD值偏低。
  
  2. 移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔,會造成什么后果?
  
  移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔,都可能導致加樣量不足,造成OD值偏低。此外,吸頭內(nèi)壁不清潔還可能導致非特異性吸附,進一步影響實驗結(jié)果。
  
  3. 操作順序顛倒或遺漏步驟,會有什么后果?
  
  如果操作順序顛倒或遺漏步驟,很可能導致實驗失敗,例如漏加酶結(jié)合物、顯色劑等,使整塊ELISA板都不顯色。
  
  4. 溫育時間不夠或溫育溫度未達到要求,會有什么影響?
  
  溫育時間不夠或溫育溫度未達到要求,都會影響反應的進行,導致OD值偏低。例如,保溫用的濕盒沒有預溫,或培養(yǎng)箱溫度不符合操作要求等。
  
  5. 洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題,會造成什么后果?
  
  洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題,如量筒不干凈、含有酶抑制物、濃度過高等,都可能導致洗去特異性結(jié)合物,使OD值偏低。
  
  6. 洗板時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗板次數(shù)過多,會有什么影響?
  
  這些操作都可能導致洗去結(jié)合在包被板的特異性結(jié)合物,從而使OD值偏低。
  
  7. 加完終止液后沒有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數(shù)或放置太久才進行讀數(shù),會有什么影響?
  
  這可能導致檢測OD值偏低或偏高。一般建議在加完終止液后3分鐘之內(nèi)進行讀數(shù)。
  
  8. 酶標儀檢測波長設定有誤,會有什么后果?
  
  如果酶標儀檢測波長設定有誤,例如選用的波長不是產(chǎn)物的敏感吸收峰,可能會導致OD值偏低或偏高。
  
  9. 陰性對照出現(xiàn)陽性結(jié)果,可能的原因是什么?
  
  陰性對照出現(xiàn)陽性結(jié)果可能是由于樣品、試劑被污染,或加樣時操作不當導致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染。此外,抗體量過多導致非特異性結(jié)合也可能是一個原因。
  
  10. 酶標板整體背景高,可能的原因是什么?
  
  酶標板整體背景高可能是由于底物孵育過程沒有避光,導致背景信號增強。
  
  11. 復孔之間重復性差,可能的原因是什么?
  
  復孔之間重復性差可能是由于加樣本及試劑量不準、孔間不一致等原因造成的。此外,操作條件、人員等的不一致也可能導致重復性差。
  
  12. 陽性對照值偏低或低吸光度,可能的原因是什么?
  
  陽性對照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時間或溫度不夠、顯色反應時間太短、顯色液變質(zhì)或試劑過期、試劑稀釋有誤等原因造成的。