深入了解PCR檢測(cè)試劑盒：組成與原理的解析

  現(xiàn)如今，遺傳學(xué)幫我我們?cè)絹?lái)越多的了解周圍世界，通過(guò)遺傳學(xué)技術(shù)解開(kāi)進(jìn)化史，更精確診斷和治療疾病。為了完成這些工作，我們需要發(fā)現(xiàn)并檢測(cè)DNA序列，然而，我們用來(lái)執(zhí)行操作基本工具之一稱為“PCR”或“聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”。今天，上海通蔚給大家介紹一下PCR檢測(cè)試劑盒作用原理及組成。

  PCR檢測(cè)試劑盒組成

  DNA模版。DNA模版，DAN模版可以包含人類血液樣品、食物樣品、水樣品以及棉簽上收集的細(xì)菌等等。

  引物（primers）。我們要擴(kuò)增DNA區(qū)域，我們需使用稱為DNA片段來(lái)實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。引物的類型分為正向和反向兩種，正向引物將匹配我們想要擴(kuò)增的區(qū)域開(kāi)頭的一條DNA鏈上的序列，反向序列引物將匹配另一條鏈上區(qū)域的末端。引物在PCR反應(yīng)起上引導(dǎo)DNA聚合酶合成新的DNA鏈的作用。

  酶（enzymes）。在PCR檢測(cè)中最主要的酶是熱穩(wěn)定的DNA聚合酶，DNA聚合酶可以找到引物與DNA模版特異性結(jié)合區(qū)域的末端，并在適當(dāng)?shù)臈l件下催化DNA合成。最常用的是來(lái)自熱液微生物生物體的熱穩(wěn)定DNA聚合酶，如Taq DNA聚合酶。

  緩沖液（buffer）:PCR檢測(cè)試劑中的緩沖液用于維持PCR最佳的反應(yīng)條。它主要作用是控制PH值、離子濃度和穩(wěn)定酶的活性。

  核苷酸（nucleotides）。核苷酸是PCR試劑中DNA合成的原料。包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧鳥(niǎo)苷酸（dGTP）、脫氧胞苷酸（dCTP）和脫氧胸苷酸（dTTP）。供給PCR反應(yīng)中的DNA聚合酶在合成新鏈時(shí)使用。

  PCR檢測(cè)試劑盒作用原理

  根據(jù)PCR技術(shù)的工作原理設(shè)計(jì)，在進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，主要分為三個(gè)步驟：

  第一步，變性。模版DNA經(jīng)過(guò)加熱至93°左右，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，為下一步退火做準(zhǔn)備。

  第二步，退火。模版DNA變性成單鏈之后，使溫度至55度左右，模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合。

  第三步，延伸。DNA模版引物在72度下，DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下，以dNTP(脫氧核糖核苷三磷酸，可構(gòu)成DNA)為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則和半保留復(fù)制原理，就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。

  上述為大家總結(jié)了PCR檢測(cè)試劑盒的組成和作用原理，希望上述文章對(duì)大家有所幫助。在操作實(shí)驗(yàn)過(guò)程可以配合說(shuō)明書(shū)及實(shí)驗(yàn)過(guò)程的注意事項(xiàng)。