ELISAKIT的基本組成和操作流程

   elisa試劑盒對于搞科研的人來說還是比較神秘，elisa試劑盒來的時候就是一個盒子，這個盒子到底有什么神奇的地方呢？又有哪些部分組成？具體操作流程有哪些？下面跟隨上海生蔚一起來了解一下吧！

  ELISAKIT的基本組成

elisa試劑盒

  酶標(biāo)板：用于抗原-抗體復(fù)合物的孵育和洗滌。

  酶標(biāo)抗體：與待測樣本中的抗原特異性結(jié)合的抗體，通常采用辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記。

  酶標(biāo)二抗：與酶標(biāo)抗體結(jié)合的特異性抗體，用于增強信號。

  底物：用于顯色反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)，如TMB（四甲基聯(lián)苯胺）或ABTS（二氨基聯(lián)苯胺）。

  終止液：用于停止顯色反應(yīng)的液體，通常是硫酸。

  洗滌液：用于清洗酶標(biāo)板上的未結(jié)合物質(zhì)。

  說明書：包含操作指南和注意事項。

  ELISAKIT操作流程

elisa試劑盒操作步驟

  準(zhǔn)備工作：將所需試劑從冰箱中取出，恢復(fù)至室溫。準(zhǔn)備一塊干凈的酶標(biāo)板，根據(jù)實驗設(shè)計設(shè)置合適的孔數(shù)和加樣位置。

  加樣：根據(jù)說明書要求，將待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品加入酶標(biāo)板上的相應(yīng)孔中。通常采用自動加樣器或手工滴加。

  孵育：將酶標(biāo)板封閉后，在恒溫條件下孵育一定時間，使抗原-抗體復(fù)合物形成。

  洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的物質(zhì)。

  加酶標(biāo)抗體：將酶標(biāo)抗體加入酶標(biāo)板上的相應(yīng)孔中，封閉后再次孵育。

  洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。

  加底物：將底物加入酶標(biāo)板上的相應(yīng)孔中，孵育一定時間后顯色。

  終止反應(yīng)：用終止液停止顯色反應(yīng)。

  檢測：用酶標(biāo)儀讀取各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)并進行分析。

  數(shù)據(jù)處理與分析：根據(jù)所得數(shù)據(jù)計算待測樣本的濃度或活性?？梢詤⒖颊f明書提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線或計算公式進行計算。

  結(jié)果報告：根據(jù)實驗?zāi)康暮鸵?，撰寫實驗報告并提交結(jié)果。

  上海通蔚提醒，在使用ELISA試劑盒時，需要注意以下操作事項：

  仔細閱讀試劑盒說明書，了解試劑盒的原理、操作步驟和注意事項。

  實驗室環(huán)境應(yīng)保持清潔，避免污染試劑盒。

  所有試劑在操作前需要充分混勻，避免沉淀或分層。

  加樣時，應(yīng)按照說明書要求，使用自動加樣器或手工滴加。

  孵育時間應(yīng)按照說明書要求進行，以確?？乖?抗體復(fù)合物充分形成。

  洗滌要充分，每孔洗液加樣過少或殘留都會導(dǎo)致顯色過快，同時背景較高。

  手洗板時所用槍頭懸空加入洗液，避免洗液污染。

  剩余酶標(biāo)板條應(yīng)及時放入干燥袋，避免受潮。

  試劑盒保存條件應(yīng)嚴格按照說明書要求進行，過高的溫度或過低的冷藏溫度都會導(dǎo)致試劑盒敏感性下降。

上述是上海通蔚介紹的ELISA試劑盒的基本組成和操作流程，在操作試劑盒過程務(wù)必要注意事項，避免導(dǎo)致實驗過程導(dǎo)致讀數(shù)出現(xiàn)誤差。