一、白板
如果顯色完成后,肉眼可見整板沒有顯示反應(yīng),可能原因及應(yīng)對(duì)方法是什么呢?通蔚生物整理了可能的原因,希望對(duì)您有幫助。
解決方案:
1,試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng);不同
ELISA試劑盒試劑混用購買新的試劑盒,注意儲(chǔ)存條件;不可混用
2,孵育溫度低,時(shí)間短如果溫度偏低,則延長孵育時(shí)間和顯色時(shí)間。
3,錯(cuò)加、漏加試劑嚴(yán)格按照說明書步驟添加正確試劑。
4,用于配置溶液的容器不干凈,或水有問題使用干凈容器以及合格的蒸餾水。
5,檢測抗體和/或HRP濃度太低參照說明書,不可隨意稀釋。
6,試劑溫度不均一所有試劑要室溫平衡 30 min。
7,洗板過程中浸泡時(shí)間長,洗板次數(shù)太多,洗板沖擊力大,嚴(yán)格按說明書操作。
二、花板
花板是指空白、陰性、陽性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的吸光度(OD值)卻明顯偏高,可能原因及應(yīng)對(duì)方法詳見下表。
1,洗滌次數(shù)少,不充分按說明書要求洗滌。
2,底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)被金屬離子或氧化劑污染或曝光配置時(shí)使用干凈容器以及合格蒸餾水;避光保存。
3,孵育溫度高和/或時(shí)間過長控制孵育和最后酶促反應(yīng)的溫度和時(shí)間。
4,ELISA試劑盒加樣時(shí)未更換槍頭,造成交叉污染每個(gè)樣都更換槍頭。
5,附近孔交叉污染洗滌時(shí),洗液不可溢出孔洞,垂直拍板;使用合適的拍板紙,避免孔內(nèi)進(jìn)入紙屑?jí)m渣;孵育時(shí)封板要嚴(yán)密,防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)。
6,樣本存在內(nèi)源性干擾物質(zhì)推測可能的感染物質(zhì),并進(jìn)行對(duì)應(yīng)處理。
7,樣本溶血、貯存過久、凝集不全、被細(xì)菌污染、采血管中添加物影響等避免溶血、污染、過久儲(chǔ)存等現(xiàn)象。