【通蔚生物】：麥芽糖含量測試盒測定原理介紹

通蔚生物麥芽糖含量測試盒測定原理介紹：

測定意義：
麥芽糖是由兩個(gè)葡萄糖單位經(jīng)由α-1，4 糖苷鍵連接而成的二糖，又稱麥芽二糖。麥芽糖是淀粉、糖原、糊精等大分子多糖類物質(zhì)在β-淀粉酶催化下的主要水解產(chǎn)物，再經(jīng)麥芽糖酶催化，則被水解成兩個(gè)葡萄糖分子。麥芽糖不僅參與了生物體內(nèi)糖代謝，其在食品和醫(yī)藥工業(yè)等行業(yè)也著廣泛應(yīng)用，是產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。
測定原理：
麥芽糖酶將樣品中麥芽糖水解為葡萄糖; 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。需自備的儀器和用品：
酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰、和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一:液體 70mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加 6 mL 試劑一溶解后待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存；試劑三：液體 10ml×1 瓶，4℃保存； 試劑四：液體 10ml×1 瓶，4℃保存； 麥芽糖提?。喊凑諛颖举|(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1mL 試劑一），研磨成勻漿，95℃水浴 10 分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清液備用。測定步驟：
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 505nm。
2、 混合試劑的配制：使用前將試劑三和試劑四 1:1 等體積混合，用多少配多少。
3、 測定管:取 200μL 上清，加入 100μL 試劑二，混勻，55℃反應(yīng) 60 min，待測。對照管：200μL 上清，加入 100μL 試劑一，混勻，55℃反應(yīng) 60 min，待測。
4、加樣表（在 96 孔板中加入下列試劑）： 試劑（μL） 測定管 對照管
測定管待測液 40
對照管待測液 40
混合試劑 160 160
混勻，40℃保溫 30 min 后，于 505nm 波長處讀取吸光度。測定管和對照管吸光值分別記為A 測定和 A 對照。ΔA=A 測定管-A 對照管。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對照管。
麥芽糖含量計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 2.8944x + 0.0052；R2 = 0.9997；為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y
為吸光值差值。
麥芽糖（mg/g 鮮重）=(ΔA-0.0052) ÷2.8944×V 總÷W =0.3455×(ΔA-0.0052)÷W
V 總：加入提取液體積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g
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