【通蔚生物】：豬圓環(huán)病毒3型染料法熒光定量PCR試劑盒原理介紹

豬圓環(huán)病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下:

1.TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'- 3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變(SNP)，有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的*技術(shù)平臺(tái)。

2.SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地參入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。

3.分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì)，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光。

熒光定量PCR服務(wù):

簡介:實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用PCR試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求:

(01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA (大于5ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于5ug/樣品)。
(02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

(03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA來源等

2、熒光定量PCR操作程序

(o1）引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。
(03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

(04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

上海通蔚生物科技有限公司自成立以來，一向以“優(yōu)異的產(chǎn)品，優(yōu)惠的報(bào)價(jià)和交心的服務(wù)”得到廣闊新老客戶的必定和支撐，不斷提高自身的專業(yè)技術(shù)水平和服務(wù)質(zhì)量，為您提供非常好的產(chǎn)品。