通蔚生物向您詳細介紹ELISA試劑操作加樣與洗板

ELISA 加樣操作要點
精準的儀器和準確的操作是保證ELISA試劑結果準確關鍵，怎樣的加樣方式才是正確呢？ELISA實驗中一般有5次加樣，即加標本、加檢測抗體、加酶結合物和加顯色底物及終止液。小科將ELISA加樣操作要點進行歸納，供參考。
實驗室使用的微量加樣器應注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會導致最后讀數(shù)差別，因此避免儀器帶來誤差。
加樣前，溶液充分混勻，垂直懸空加入液體，避免加在孔壁上，不可產(chǎn)生氣泡。
加樣時避免液體濺出，如有樣本濺出，應用吸水紙輕輕拭干，并做相應記錄。
如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加，做相應記錄實驗。
每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個孔顯色時間相同。

ELISA 洗板操作要點

ELISA試劑實驗通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體干擾物質。因此，不嚴格的洗滌容易出現(xiàn)交叉污染或洗不干凈背景高。 洗滌是ELISA實驗操作最多一個步驟，如何洗板呢？
通蔚生物ELISA試劑洗液需要20倍稀釋，配置時用新鮮無污染的蒸餾水或去離子水現(xiàn)配現(xiàn)用。洗液如果結晶應待其融解后配制。
垂直倒液，迅速、干脆，重復2-3次，不要手腕左右搖擺、旋轉來倒液體。
倒液后將酶標板放在吸水紙拍干。用干凈的濾紙，不要用衛(wèi)生紙，因為細小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導致洗板不干凈，結果偏高或偏低，重復孔的數(shù)值也會相差很大。
每孔加300uL洗液，太多將溢出孔外污染相鄰的孔。特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度孔流串到低濃度孔或空白孔，其造成的交叉污染將無法洗掉，背景增高。
加入洗液浸泡30s。洗板時間太短，洗滌效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。