ELISA實驗概念與原理：免疫酶測定法(ELISA)實驗原理及類型

ELISA實驗原理及類型

將已知抗體或抗原結合在某種固相載體上，并保持其免疫活性。測定時將待檢標本和酶標抗體或酶標抗原按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應，用洗滌的方法分離抗原抗體復合物和游離物成分，然后加入底物顯色，進行定性或定量測定。

ELISA可用于檢測抗體，也可用于檢測抗原。根據(jù)檢測目的和操作步驟的不同，通常有三種類型的檢測方法。
1．間接法 此法是檢測抗體最常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測血清(抗體)與之結合，洗滌后，加酶標抗體和底物進行測定。其原理見圖一。

圖一 ELISA間接法示意圖

2．雙抗體夾心法 此法常用于檢測抗原。將已知抗體吸附于固相載體，加入待測標本(含相應抗原)與之結合，溫育后洗滌，加入酶標抗體及底物溶液進行測定。見圖二。

3．競爭法 此法可用于抗原及半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體上，加入待測抗原和一定量的已知酶標抗原，使二者競爭地與固相抗體結合，經(jīng)過洗滌分離，最后結合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關。見圖三。