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大鼠 MBP 抗體 ELISA 試劑盒說明書
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷！
大鼠MBP 抗體 ELISA 試劑盒 是一款用于定量檢測大鼠血清或血漿中髓鞘堿性蛋白 (MBP) 抗體的試劑盒。本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中大鼠髓鞘堿性蛋白（MBP）的含量。試劑盒采用雙抗體夾心法，具有高靈敏度、高特異性，操作簡便的特點，可用于研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病和免疫功能等方面的科研工作者。
有效期：6個月
保存條件：2-8℃
種屬：大鼠
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠髓鞘堿性蛋白（MBP）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP 標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物 TMB 顯色，TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠髓鞘堿性蛋白（MBP）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4℃ 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃ 或-80℃ 保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8℃ 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃ 或-80℃ 保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的 PBS (0.01M, pH=7.4) 沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的 PBS（一般按1:9的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應 9mL 的 PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘，取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃ 或-80℃ 保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
- 酶標儀（450nm）
- 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃ 恒溫箱
- 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
8孔 x 12條
8孔 x 6條
無
標準品
0.3mL * 6管
0.3mL * 6管
無
樣本稀釋液
6mL
3mL
無
檢測抗體- HRP
10mL
5mL
無
20 x 洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進行稀釋
底物A
6mL
3mL
無
底物B
6mL
3mL
無
終止液
6mL
3mL
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
白封袋
1個
1個
無
空白稀釋板
1塊
1塊
選配
橡膠手套
2副
2副
選配
備注：
- 標準品濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0.25 ng/mL
- 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取 50μL 樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
注意事項
- 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
- 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
- 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。
- 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
- 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
- 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
- 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
- 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
- 不能使用過期產(chǎn)品。
- 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
- 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
- 20× 洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份 20× 洗滌緩沖液加 19 份蒸餾水。
操作步驟
- 從室溫平衡 20min 后 的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
- 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；
- 樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃ 水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
- 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
- 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃ 避光孵育 15min。
- 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的 OD 值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的 OD 值代入方程，計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
- 檢測范圍：0.25 ng/mL – 8 ng/mL。
- 靈敏度：最低檢測濃度小于 0.1 ng/mL。
- 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。
- 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于 15% 。
說明
- 由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術風險。
- 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關，請務必準備充足的標本備份。
- 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
- 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。
- 本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。
- 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致 ELISA 實驗結(jié)果偏差。
- 若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
- 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。
