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021-54845833/15800441009
中文名稱： 免疫組化試劑盒（適用于兔/小鼠一抗）
英文名稱： Immunohistochemistry Kit(Apply to rabbit or mouse primary antibody)
相關(guān)類別： 抗體相關(guān)支持試劑
儲 存： 冷藏（2-8℃）
概 述
該免疫組化試劑盒適用范圍為石蠟包埋組織切片，也可用于固定后的冰凍切片。
特 點(diǎn)
操作簡便：無需太多準(zhǔn)備，拿到試劑盒既能開展試驗。 重現(xiàn)性好：實驗結(jié)果重復(fù)性高。
應(yīng) 用
用于免疫組織化學(xué)實驗，兩種包裝分別可用于20張和50張切片。
使用說明
1. 組織固定：在脫蠟之前，將切片60°C恒溫箱中烘烤60分鐘。
2. 脫蠟：將切片用二甲苯浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘。
3. 水化：分別用無水乙醇浸泡5分鐘；95%乙醇中浸泡5分鐘；85%乙醇中浸泡5分鐘；75%乙醇中浸泡5分鐘。
4. 洗滌：ddH2O浸泡5分鐘，清洗3次。
5. 抗原修復(fù)（煮沸法）：壓力鍋中加入足以淹沒切片的10 mmol/L的枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）（配制：將復(fù)性劑溶于相應(yīng)體積 ddH2O中，混勻），加熱至沸騰，切片置耐熱塑料切片架上，放入鍋中，蓋好鍋蓋，扣上壓力閥，繼續(xù)加熱，設(shè)置保壓3 min，時間到后打開放氣閥放氣，壓力歸零后開鍋蓋將內(nèi)鍋取出放置室溫冷卻，待溶液冷卻至室溫后取出切片（約30 min）。
6. 洗滌：ddH2O浸泡5分鐘，清洗2次，PBST浸泡5分鐘，清洗2次。
7. 滅活酶：每張切片滴加50 μl滅活酶試劑，室溫避光處理15分鐘。
8. 洗滌：PBST浸泡5分鐘，清洗3次。（第一次迅速倒掉）
9. 封閉：每張切片滴加3% BSA-PBST 50 μl，濕盒中室溫封閉30分鐘。
10. 加一抗：棄去封閉液，每張切片滴加50 μl一抗，4℃濕盒中孵育過夜或37°C 1小時。
11. 復(fù)溫：次日取出切片，室溫復(fù)溫40分鐘。
12. 洗滌：PBST浸泡5分鐘，清洗3次。（第一次迅速倒掉）
13. 加酶標(biāo)二抗：每張切片滴加HRP標(biāo)記的二抗（抗兔/小鼠）25μl，室溫或37°C孵育30分鐘。
14. 洗滌：PBST浸泡5分鐘，清洗3次。（第一次迅速倒掉）
15. 顯色（DAB法）：每張切片滴加50 μl顯色液（顯色液配制：85% ddH2O+ 5% DAB緩沖液+5% DAB底物+5% DAB色原，避光現(xiàn)配現(xiàn)用，按需要量配制），濕盒中顯色5分鐘。
16. 終止顯色：用蒸餾水終止顯色反應(yīng)。
17. 復(fù)染：每張切片滴加50 μl蘇木素體細(xì)胞快速染色液，染色5分鐘 ，用蒸餾水沖洗干凈。
18. 脫色反藍(lán)：將切片放入1%鹽酸~乙醇中脫色3~5秒后迅速取出放入蒸餾水中終止，再放入PBST中反藍(lán)5分鐘。
19. 封片：分別在75%乙醇中浸泡5分鐘；85%乙醇中浸泡5分鐘；95%乙醇中浸泡5分鐘；無水乙醇中浸泡5分鐘。用二甲苯浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘。之后在切片上加中性樹膠，加蓋玻片。
20. 觀察：顯微鏡。
組份
復(fù)性劑（溶解前請混勻） HRP標(biāo)記的二抗（抗兔/小鼠） DAB緩沖液（20×） DAB底物（20×） DAB色原（20×） 蘇木素體細(xì)胞快速染色液
