HUVEC-GFP/人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化-綠色熒光蛋白標(biāo)記(免疫熒光鑒定)

細(xì)胞名稱

HUVEC-GFP/人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化-綠色熒光蛋白標(biāo)記

貨 號

TW-CC3770

細(xì)胞品牌

通蔚生物

種屬來源

人

組織來源

臍靜脈

生長特性

貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)

內(nèi)皮細(xì)胞樣

細(xì)胞簡介

Luciferase HUVEC細(xì)胞穩(wěn)定表達螢光蛋白。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持?？捎米魑灩獾鞍谆钚詸z測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。HUVEC-GFP細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。HUVEC細(xì)胞來源于人靜脈內(nèi)皮，可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤

特別注意

1、HUVEC細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其GFP熒光強度會逐漸減弱。

2、若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選，可定期用1.0ug/ml濃度puro維持。若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2.0ug/ml puro的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5.0ug/ml。若篩選過程中，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度puro進行篩選。當(dāng)加入5.0 ug/ml puro時細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

3、建議收到HUVEC-GFP細(xì)胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

細(xì)胞代數(shù)

10代以內(nèi)

生物安全等級

1

細(xì)胞規(guī)格

1x10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管

培養(yǎng)基

內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

細(xì)胞貨期

現(xiàn)貨，1周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

T25瓶

收貨處理

觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

傳代密度

細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項

1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

2.因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。

凍存管

收貨處理

收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇

傳代密度

第二天換液并檢查細(xì)胞密度

傳代比例

一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意事項

1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存。

2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。

凍存液配方

無血清凍存液，液氮儲存

細(xì)胞密度

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例

凍存方法

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細(xì)胞計數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

細(xì)胞予
重發(fā)

1.細(xì)胞運輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。

2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)。

6.細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細(xì)胞不予
重發(fā)

1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。

2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

特別說明

上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務(wù)電話 : 021-54845833 ,我們隨時給予實驗中的免費解答。