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人骨髓單個核細胞
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 人骨髓單個核細胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 骨髓
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
人骨髓單個核細胞分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。
骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓單個核細胞是骨髓中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞。注意這里是(m ononuclear cell)單個核細胞，而不是(M onocyte)單核細胞。單個核細胞的體積、形態(tài)和比重與骨髓其他細胞不同，利用一定比例聚蔗糖和泛影酸鈉形成的等滲溶液作密度梯度離心，使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，可將各種血細胞與單個核細胞分離。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人骨髓單個核細胞采用取骨髓、通過密度梯度離心法制備而來制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的人骨髓單個核細胞經(jīng)檢測，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 半貼壁半懸浮
細胞形態(tài) ： 圓形
傳代特性 ： 不增殖；不傳代
傳代比例 ： 不傳代
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人骨髓單個核細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
人骨髓單個核細胞是一種半貼壁半懸浮細胞，細胞形態(tài)呈圓形，在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下，細胞不增殖；不傳代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2.貼壁細胞消化
1) 收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用吸管吸取PBS，吹洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀①。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，收集細胞懸液至離心管中；經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基，重懸細胞沉淀①、細胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，按實驗需求接種于實驗器皿內(nèi)，然后補充適量新鮮的完全培養(yǎng)基，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，用于實驗；可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
