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人骨骼肌微血管內皮細胞
產品簡介
產品名稱 ： 人骨骼肌微血管內皮細胞
產品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 骨骼肌組織
產品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
人骨骼肌微血管內皮細胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40% 。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結構和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經支配下收縮或舒張，進行隨意運動。微血管又稱毛細血管。分布于各種組織和細胞間的最微細的血管。
介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7～9微米，數(shù)量極多，成網狀分布。管壁由一層內皮細胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米?；ね饷嬗斜咏Y締組織，其中有纖維細胞、巨噬細胞和周細胞等。最細的微血管由一個內皮細胞圍成管腔，較粗的微血管由2～3個內皮細胞圍成。分布于肌肉組織、神經組織和結締組織中的微血管，內皮細胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃)，稱連續(xù)微血管。血管內皮細胞在器官和組織的結構和功能上起著非常重要的作用。并與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展有關。
近年來血管內皮細胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn)，不同來源的內皮細胞在生物學特征、結構和功能等方面均存在一定差別，而同是微血管內皮細胞，它們又存在器官和組織的特異性。骨骼肌組織是動物體內含量最多的組織，肌肉組織供血豐富，是研究內皮細胞功能和血管生成的理想靶組織。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人骨骼肌微血管內皮細胞采用膠原酶消化結合差速貼壁法、專用培養(yǎng)基篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的人骨骼肌微血管內皮細胞經C D 31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： PLL(0.1m g/ml)，明膠(0.1%)
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態(tài) ： 內皮細胞樣
傳代特性 ： 可傳3代左右
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人骨骼肌微血管內皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
人骨骼肌微血管內皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內皮細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞可傳3代左右；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2.貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3.細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm ，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液0.5m L至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min (或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 經1000rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(補加1% FBS，促進貼壁)重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內。
5) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預熱)。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
